小鼠血管內皮生長因子（VEGF）ELISA檢測試劑盒

本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中小鼠血管內皮生長因子（VEGF）的含量


l  有效期：6個月
l  保存條件：2-8℃
l  本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床診斷
 
實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被小鼠血管內皮生長因子（VEGF）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠血管內皮生長因子（VEGF）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
 
樣本處理及要求
1.  血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2.  血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3.  組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。
4.  細胞培養物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
注：標本溶血會影響檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
 
需要而未提供的試劑和器材
1.  酶標儀（450nm）
2.  高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.  37℃恒溫箱
4.  蒸餾水或去離子水
 
試劑盒組成
 

備注：
1.  標準品濃度依次為：240、120、60、30、15、7.5 pg/mL
2.  經過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過標準品濃度時，可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。